Ürün Açıklaması

M44 MICROGEN® E.COLI 0157

 M44 MICROGEN®E. coli 0157;  insan fekal örnekleri veya gıda örneklerinin seçicibesiyeri kültürlerinin E. coli 0157 serogrubu için identifikasyon doğrulaması amacıyla geliştirilmişlatex slide aglütinasyon testidir. Kit, E. coli 0157 serogrubunun diğer E.coli serotiplerinden ve fekal örnekteki diğer mikroorganizmalardan hızlıbir şekilde ayrımını gerçekleştirir.

ÇALIŞMA PRENSİBİ

Latex parçaları, E. coli0157 serogrubuna ait somatik ( hücre duvarı) lipopolisakkarit 0157 antijeninekarşı reaksiyon gösteren antibodyler ile kaplanmıştır. E. coli 0157 antijenlerini içeren bakteriyal süspansiyon, duyarlı antibodyler ile kaplı latexpartiküller ile karıştırıldığında aglütinasyonsonucu çökelti oluştuğu gözlenmektedir.

KİT İÇERİĞİ

KİT İÇERİĞİNE İLAVE EDİLECEKLER

·        Bakteriyalöze

·        %1’likD-sorbitol içeren (lactose yerine) MacConkey Agar  ( Sorbitol MacConkey Agar ) ile hazırlanmışpetriler.

ÖRNEKHAZIRLAMA

Hasta numunelerinden (kanlı dışkıörneği), Sorbitol MacConkey Agar (lactose yerine %1’lik D-sorbitol içeren)bulunan petrilere inokülasyon yapınız. 35-37 °C’de 18-24 saat aerobikkoşullarda inkübe ediniz. E. coli 0157:H7 toksigenik suşları diğerE.coli suşlarından morfolojik açıdan farklı olarak renksiz koloniler ( sorbitolfermente edemeyen koloniler) şeklinde gözlenirler. Test için E. coli 0157:H7 morfolojisindekikolonileri seçiniz.

E. coli 0157:H7 morfolojisine benzerlik gösteren E. hermani ve P.stuartiigibi türlerin de bu besiyerinde büyüyebilme ihtimalini unutmamak gerekir.

PROSEDÜR

REAKTİFKONTROL

MICROGEN®E. coli 0157 TestLatex Reagent’dan ( M44a) (Kitiçerisinde mevcut) ve Control Latex Reagent’dan(M44b) (Kit içerisinde mevcut)  slide üzerinde iki ayrı kuyuya 1’er damla damlatınız.

Her iki kuyudaki reaktifler üzerine 1 damla tuz çözeltisi (M40) (saline)(Kit içerisinde mevcut)  ilave ediniz.

Her bir kuyu için ayrı karıştırmaçubuğu kullanarak reaktif ve tuz çözeltisini karıştırıp, kuyu içerisineyayınız.

Slide’ı hafifçe sallayıp, 30 saniye bekletiniz. Süre sonundaaglütinasyon gözlenir ise reaktiflerden en az biri veya tuz çözeltisi kontamineolmuş demektir ve yeni kit kullanılmalıdır.

POZİTİF KONTROL

Test slide üzerinde iki ayrı kuyuya E. coli 0157 olduğundan emin olunan örnekten Test Prosedüründekigibi emülsiyon oluşturunuz. Slide’ı hafifçe sallayıp, 30 saniye bekletiniz veoto-aglütinasyonu gözleyiniz.

Oto-aglütinasyon gözlenmiyorsa, emülsiyon bulunan bir kuyuya Test Latex Reagent’dan  ( M44a) 1 damla, diğer bir kuyuya Control Latex Reagent’dan (M44b) 1damla damlatınız. Damlalığı slideüzerine değdirmeyiniz.  

Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakika bekletiniz ve aglütinasyonugözleyiniz.

Test latex reaktifi ile aglütinasyon gözlenmeli, fakat kontrollatex reaktifi ile aglütinasyon gözlenmemeli.

Eğer beklenen sonuçlar elde edilemiyorsa, reaktifler bozulmuş veyakontamine olmuştur ve yeni kit kullanılmalıdır.

TESTPROSEDÜRÜ

1.      İzotonik tuz çözeltisinden (M40) (saline) Microgen® aglütinasyon slide (Kit içerisinde mevcut)   üzerindeki iki kuyuya 1’er damla(30 µl)damlatınız.

2.      Steril öze ile Sorbitol MacConkey Agar kültüründen olası E. coli kolonilerini seçiniz.(Morfolojileri uygun renksiz kolonileri seçiniz.)

3.      Tuz çözeltisi içerisinde iki ayrıkuyuda bakteriyal kültür ile ağır vedüz bir emülsiyon oluşturunuz ve kuyu içerisinde örneği yayınız.

4.      Slide’ı hafifçe sallayıp, 30saniye bekletiniz ve oto-aglütinasyon veya kümeşleme olup olmadığını kontrolediniz. İstenen şekilde kümeleşme olmadan düz-yumuşak emülsiyon halinikoruyorsa ADIM 5’e geçiniz. Eğeroluşturduğunuz emülsiyon “ipliksi” veya “taneli” görünüme sahip ise örnek, bulatex test için uygun değildir ve yanlış aglütinasyon sonucu verebilir. Budurumda, alternatif başka bir testin uygulanması gerekmektedir.

5.      Tüm latex reaktifleri ( M44a veM44b)  nazikçe karıştırarak homojen halegetiriniz.

6.      Microgen®E. coli 0157 Test Latex Reagent’dan ( M44a) bakteriyalsüspansiyon bulunan kuyulardan birine 1 damla ve bakteriyal süspansiyon bulunandiğer kuyuya Microgen®E. coli 0157 Control Latex Reagent’dan (M44b) 1damla damlatınız. Damlalığı slideüzerine değdirmeyiniz.

7.      Latex reaktifleri ve bakteriyalsüspansiyonu her kuyu için ayrı karıştırma çubuğu ile karıştırınız vekuyu içerisinde örneği yayınız.

8.      Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakikabekletiniz. 2 dakika sonunda aglütinasyon sonuçlarını gözleyiniz.

9.      Okuma sonrasında kullanılan tümlatex slidelar ve karıştırma çubuklarını atınız.

YORUM